Infecção de mycobacterium bovis em células fagocíticas: estratégia aplicada ao diagnóstico da tuberculose bovina

Neste trabalho foram estudadas as interacções entre Mycobacterium bovis e células hospedeiras, na perspectiva de aplicar os conhecimentos resultantes desse estudo ao melhoramento do diagnóstico da tuberculose bovina. Foi estudada a dinâmica da infecção de células fagocíticas com estirpes de M. bovis, com ênfase para a invasão e multiplicação intracelular das micobactérias. Avaliações efectuadas por citometria de fluxo, microscopia de fluorescência e contagem de colónias demonstraram que as micobactérias invadiram e replicaram em todos os modelos celulares, sendo que as células epiteliais de pulmão de bovino foram as mais permissivas ao seu crescimento. Foi nas células macrofágicas J774 e THP-1 que se verificaram as maiores concentrações micobacterianas, pelo que foram utilizadas para a detecção e identificação de M. bovis por um método molecular. A optimização da extracção de DNA, por um processo mecânico, e o desenvolvimento do método de PCR-RFLP baseado no gene gyrB, com controlo interno, permitiram a identificação de M. bovis. A sensibilidade deste método foi de 100% quando aplicado a estirpes isoladas e apenas de 40% quando utilizado directamente em amostras de macerados de tecidos de bovinos com tuberculose. Uma pré-incubação (3 dias) das amostras nas culturas celulares contribuiu para melhorar significativamente a sensibilidade (77%) do PCR-RFLP gyrB. A cultura celular, como matriz a ser utilizada para aumentar a quantidade de M. bovis presente em amostras biológicas, revela-se um método promissor para o diagnóstico laboratorial rápido, específico e sensível da tuberculose bovina. ### - Summary - Interactions between Mycobacterium bovis and host cells were studied with the purpose to apply the outcome knowledge in the improvement of bovine tuberculosis diagnosis. The dynamic of infection of four cell models with three strains of M. bovis was evaluated, with emphasis given to the invasion and intracellular multiplication of mycobacteria. Assessments by flow cytometry, fluorescence microscopy and colony counting showed that every cell models permitted the replication of mycobacteria, although bovine lung epithelial cells had been the most permissive one. The highest mycobacteria) load was found, however, in J774 and THP-1 macrophages, and hence these cells were used for the optimization of a molecular method for detection and identification of M. bovis. The optimisation of a DNA extraction step, by a mechanical process, and the development of PCR-RFLP based on gyrB gene, with an internal control, allowed the identification of M. bovis. The sensitivity of this method was 100% when applied to isolated strains and only 40% when directly used on samples of macerated of tissues from cattle with tuberculosis. Assays in which a pre-incubation step (three days) of biological samples in cell cultures was introduced significantly improved the sensitivity (77%) of the gyrB PCR-RFLP. Cell cultures as a support for growth and rapid isolation of M. bovis is a promising method for the specific, sensitive and rapid laboratorial diagnosis of bovine tuberculosis.

Acompanhamento farmacoterapêutico de doentes com tuberculose em regime ambulatório

Objectivo: Este estudo tem como objectivo principal a avaliação do impacto do acompanhamento farmacoterapêutico sobre o estado de saúde de doentes com tuberculose (casos novos) em tratamento em regime de ambulatório. Métodos: O estudo incluiu um período de screening com a duração de um mês, seguindo de um período de estudo com a duração de 12 meses. O estudo foi aberto, multicêntrico, randomizado com um grupo de estudo (n=35) e um grupo controlo (n=41). Como metodologia de intervenção foi aplicado uma metodologia baseada num estado de situação do doente e avaliação sistemática de resultados clínicos negativos da medicação. Os dados foram trabalhados em folha de cálculo Microsoft excel2003. Resultados: No grupo de estudo foram efectuadas 665 intervenções farmacêuticas, sobre 490 resultados clínicos negativos da medicação e 175 riscos de resultados clínicos negativos da medicação, de um total de 737 detectados. Houve intervenção sobre 90,23% dos resultados clínicos negativos da medicação, tendo-se resolvido 80,73%. O grupo de estudo teve uma melhor adesão à terapêutica (73,17% no grupo de estudo; 26,83% no grupo controlo) e melhores resultados microbiológicos (p=0,046)), não tendo sido encontradas diferenças estatísticas relativamente aos parâmetros clínicos e radiológicos. Conclusão: O acompanhamento farmacoterapêutico permite detectar, prevenir e resolver resultados clínicos negativos da medicação, resultando assim num impacto positivo sobre o estado de saúde dos doentes com tuberculose em regime de ambulatório. ABSTRACT: Objective: Main objective of this study is to evaluate the impact of medication follow­ up on the health status of patients with tuberculosis (incident cases) in treatment in an ambulatory regimen. Methods: The study included a screening period of one month and then a follow-up period of twelve months. lt was an open study, multicentric, randomized, with a study group (n=35) and a control group (n=41). Intervention consists in a process based on gathering patients’ therapeutic profile and its systematic evaluation of medication negative clinical outcomes. Data were processed in Microsoft Excel 2003 worksheet. Results: ln the study group 665 pharmaceutical interventions on 490 medication negative clinical outcomes due were recorded and 175 risk of negative clinical outcomes, having being detected a total of 737. Pharmacist interventions were done on 90.23% of negative clinical outcomes, resolving 80.73%. The study group had a better therapeutic compliance (73.17% in the study group; 26.83% in the control group) and better microbiological results (p=0.046). However, there were no differences concerning clinical and radiological parameters. Conclusion: Medication follow-up allows detecting, preventing and resolving medication negative clinical outcomes, having a positive impact on tuberculosis patients' health status treated in an ambulatory regimen.